어둡게 만드는 것은 배경
암시야는 단순히 조명 밝기를 낮추는 설정이 아니다. 시료를 비추는 빛은 있어도 직접광은 대물렌즈를 비껴가도록 배치한다. 시료가 빛을 산란시켜 렌즈 안으로 보내면 그 부분이 밝게 보인다. 시료가 없을 때 시야가 어두운 이유도 이 배치에 있다.
비껴 비추는 조명
대표적인 투과 암시야에서는 광축 부근의 빛을 가리고 비스듬한 방향에서 시료를 비춘다. 대물렌즈에는 시료와 상호작용해 방향이 바뀐 빛이 들어온다. 빛이 시료를 지나간다는 사실보다 어떤 경로의 빛을 영상에 포함하는지가 중요한 차이이다.
잘 보이는 구조와 실제 모양
암시야는 투명한 시료의 가장자리와 미세 구조를 두드러지게 만들 수 있다. 그러나 영상은 산란광의 분포이므로 밝은 윤곽을 언제나 실제 기하학적 경계와 정확히 같은 것으로 볼 수 없다. 대비를 높인 관측과 치수를 정확히 측정한 결과는 구분해야 한다.
오염도 산란광을 만든다
먼지나 섬유, 지문 잔여물 역시 빛을 산란시켜 밝게 보일 수 있다. 관심 시료 외의 신호가 증가하면 어두운 배경의 장점이 줄어든다. 따라서 밝은 점이 보인다는 사실만으로 그 점이 관찰하려던 세포나 입자라고 확정할 수는 없다.